Formulación de Docetaxel 80 mg solución para infusión inyectable


ARTÍCULO ORIGINAL

 

Formulación de docetaxel 80 mg solución para infusión inyectable

 

Formulation of 80 mg docetaxel solution for injectable infusion

 

 

Armando Gato del Monte, Aurora Izquierdo Labañino, Yamilé Vega Regué

Centro de investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). La Habana, Cuba.

 

 


RESUMEN

Introducción: el docetaxel es un taxoide extraído de las agujas del tejo europeo Taxus baccata. Estimula el ensamblado de los microtúbulos e inhibe la despolimerización de la tubulina. Se presenta la formulación de docetaxel 80 mg IV, con requerimientos de calidad para su uso en la terapia del cáncer.
Objetivo: comprobar la calidad farmacéutica del medicamento mediante los análisis físicos, químicos, y microbiológicos, así como realizar los estudios de estabilidad mediante la Cromatografía Líquida de Alta Resolución.
Métodos: con el docetaxel trihidratado (lote: IF070310, con 99,37 % de pureza) de la IFECT CHEMPHAR Co., Ltd de China, se prepararon distintas variantes tecnológicas de formulación. Con el Polisorbato 80, alcohol deshidratado y ácido cítrico monohidratado, se elaboraron tres lotes: 11001; 11002; 11003. La formulación desarrollada se envasó en bulbos 10 R incoloros de calidad hidrolítica I, a 40 mg/mL, cerrados con tapones de goma butílica y sellos de aluminio anodizado de Ø 20 mm. Se determinó la ausencia de microorganismos aeróbicos, y anaeróbicos en las áreas de producción. Se estudió la estabilidad del docetaxel en la formulación por los métodos acelerado y vida de estante, y la esterilidad en el producto terminado.
Resultados: los análisis físico-químicos realizados a los lotes del escalado piloto cumplieron con las especificaciones de calidad de la técnica analítica desarrollada por el departamento de estabilidad del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos, así como con la de esterilidad y apirogenicidad.
Conclusiones: los tres lotes analizados al inicio y a los 12 meses almacenados a temperatura de 2-8 °C respondieron a las exigencias de calidad establecidas. El docetaxel se pudo utilizar (80 mg) como solución inyectable en la terapia del cáncer.

Palabras claves: docetaxel; taxanos; estabilidad; citostáticos.


ABSTRACT

Introduction: docetaxel is a taxoid extracted from the English yew Taxus baccata. It stimulates the assembling of microtubules and inhibits tubulin depolymerization. The formulation of 80 mg IV docetaxel with quality requirements for use in cancer therapy was presented in this paper.
Objective: To prove the pharmaceutical quality of the drug through physical, chemical and microbiological analyses and to conduct stability studies based on high performance liquid chromatography.
Methods: Using docetaxel trihydrate (batch IF070310 99.37 % purity index) from IFECT CHEMPHAR Co., Ltd, China, several technological variants for formulation were prepared. With Polysorbate 80, dehydrated alcohol and monohydrate citric acid, three batches were prepared: 11001; 11002; 11003. The final formulation was packed in 10 R colorless bottles of hydrolytic quality I, at a dose of 40 mg/mL, closed with butyl rubber stoppers and Ø 20 mm anodized aluminum seals. Lack of aerobic and anaerobic microorganisms was confirmed in the production areas. docetaxel stability in the formulation was studied with the acceleration and the shelf-life methods, as well as the finished product´ sterility.
Results: Physical and chemical analyses of all the pilot-scaling batches met the quality specifications of the analytical technique devised by the stability department of the Drug Research and Development Center, and also the sterility and apyrogenicity specifications.
Conclusions: The three batches analyzed at the beginning of storage and 12 months later at 2-8 °C temperature responded to the set quality demands. docetaxel (80 mg) could be used as injectable solution for cancer therapy.

Keywords: docetaxel, taxane, stability, cytostatics.


 

 

INTRODUCCIÓN

El cáncer de mama es considerado una enfermedad sistémica; por consiguiente, el tratamiento representa un componente fundamental en el manejo médico de los pacientes que padecen de esta malignidad endémica.1

El docetaxel, un análogo semisintético del paclitaxel con mayor solubilidad en agua, se sintetizó a partir del 10-deacetil baccatin III unos 10 años más tarde. Se han publicado varios artículos de revisión sobre la clínica y preclínica de la farmacocinética de paclitaxel y docetaxel se han publicado.2-5

Este agente antineoplásico pertenece a la clase de los taxoides. Su principal actividad citotóxica esta basada en la estabilización de la tubulina y la detención del ciclo celular, fosforila la apoptosis por bloqueo de la oncoproteina bcl-2 e inhibe la angiogénesis.6 Ello conduce a la formación de haces de microtúbulos en las células que, al quedar bloqueadas en fase M del ciclo celular, conducen a la muerte celular. El método in vitro ha mostrado una actividad antimicrotúbulo más potente que el Paclitaxel7 en el tratamiento de pacientes con cáncer de mama metastásico o localmente avanzado tras el fracaso de la terapia citotóxica. La quimioterapia administrada previamente, debe haber incluido una antraciclina o un agente alquilante, así como en el tratamiento de cáncer de pulmón no microcítico metastásico o localmente avanzado, tras el fracaso de la quimioterapia previa.

En el mercado internacional existen diversas formulaciones de docetaxel con nombre comercial Taxotere® de la SANOFI-AVENTIS, en cuya formulación se incluye el polisorbato 80, y alrededor de 4 ml de este detergente no iónico es administrado junto con una dosis estándar (173 mg) de docetaxel. La concentración plasmática de polisorbato 80 es de aproximadamente 0,1 % durante la infusión y el compuesto es rápidamente aclarado del plasma.2,8,9

El objetivo del presente trabajo es comprobar la calidad farmacéutica del medicamento mediante los análisis físicos, químicos, y microbiológicos, así como realizar los estudios de estabilidad mediante la Cromatografía Líquida de Alta Resolución.

 

MÉTODOS

Con el Docetaxel trihidratado (lote: IF070310, con 99,37 % de pureza) de la IFECT CHEMPHAR Co., Ltd de China, se prepararon distintas variantes tecnológicas de formulación, utilizando Polisorbato 80, alcohol deshidratado y ácido cítrico monohidratado.

Se realizaron tres lotes: 11001, 11002 y 11003 a partir de estudios de preformulación en los que se variaron los órdenes de adición de docetaxel y los excipientes, consistentes en alcohol deshidratado y polisorbato 80. Se utilizó ácido cítrico monohidratado para el ajuste del pH de la formulación entre 3,0-7,0. La formulación más prometedora, al final de los ensayos, se envasó en bulbos 10 R incoloros de calidad hidrolítica I, a una concentración de 40 mg/mL. Se emplearon tapones de goma butílica y sellos de aluminio anodizado de Ø 20 mm, para conservarlos.

Los microorganismos aeróbicos y anaeróbicos no deben estar presentes en los medicamentos inyectables para uso humano. Por ello se eliminan por filtración y esterilizante; para lo cual se empleó un filtro de cartucho sartofluor minicaps de 0,2 μm, el cual es compatible con los excipientes de la formulación y cuya integridad se comprobó antes y después de esta operación con el empleo de un equipo Sartochek Junior, Alemania.

Para determinar la ausencia de endotoxinas bacterianas en la formulación inyectable, se empleó el método cromogénico cinético del LAL mediante el juego de reactivos Pyrochrome® (Associates of Cape Cod, E. Falmouth, MA, USA), de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Para el ensayo del LAL, se reconstituyó la muestra con tampón Glucashield (Associates of Cape Cod, E. Falmouth, MA, USA), el cual produce un reactivo LAL específico para endotoxinas.

Para la validación se evaluaron una serie de diluciones de la muestra que fueron probadas en paralelo con su correspondiente control positivo. Las diluciones no excedieron la máxima dilución válida del producto para el ensayo LAL empleado. El control positivo consistió en la dilución del producto; a la cual se le adicionó una concentración conocida de endotoxinas de 0,5 EU/mL. Para que el ensayo sea válido, el recobrado de la endotoxina adicionada en el control positivo tiene que encontrarse entre 50-200 % en tres unidades representativas de un lote. Se realizó una curva patrón de endotoxinas de 0,01-5 EU/ml.

Para determinar la esterilidad del producto terminado, se realizó la filtración esterilizarte por membrana de 0,45 µm, transfiriendo iguales porciones del filtrado a medios de cultivo, soya-caseína y fluido tioglicolato de sodio, los que son posteriormente incubados a las temperaturas entre 22,5 ± 2,5 °C y 32,5 ± 2,5 °C, respectivamente, y observadas al microscopio por períodos de 7 y 14 días.12

Se estudió la estabilidad del docetaxel en la formulación por los métodos acelerado y vida de estante a través de la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, contemplados en el Proyecto de Regulación de los Requerimientos sobre los Estudios de Estabilidad establecidos por el CECMED,10 valorándose las muestras al inicio, 1, 2, 3 y 6 meses, las que se almacenaron a 30 ± 2 ºC, 75 % de humedad relativa (Hr) y las almacenadas a temperatura de refrigeración (2-8 ºC), protegidas de la luz, se valoraron al inicio, 3; 6; 9 y 12 meses. Durante las etapas de investigación se utilizaron aisladores los cuales permiten la protección del medicamento, el hombre y el medio ambiente.

 

RESULTADOS

De las variantes tecnológicas preparadas en combinación con los excipientes que forman parte de la formulación, la más prometedora se mantuvo estable física y químicamente durante tres meses. A partir de ahí se formularon los lotes 11001, 11002 y 11003 del escalado piloto; los cuales cumplieron con las especificaciones de calidad de la técnica analítica desarrollada por el departamento de estabilidad13 del CIDEM, y con los análisis microbiológicos reportados en la USP 33.

La tabla 1 muestra los resultados iniciales del análisis de los lotes 11001, 11002 y 11003 del docetaxel 80 mg solución. La tabla 2 muestra el estudio de la estabilidad acelerada y de humedad relativa. En la tabla 3 se presentan los resultados del estudio de estabilidad físico-químico del producto terminado almacenado en temperatura de refrigeración (2- 8 ºC) durante 12 meses.

 


En la tabla 4 se presentan los resultados de la determinación inicial de endotoxinas bacterianas por el método de LAL cromogénico cinético.

La reacción para determinar las endotoxinas bacterianas se verificó cinéticamente a 405 nm y 37 ºC por 1 h, a través de un lector de microplacas Biotek elx808™ IU (Biotek Instruments, Winooski, Vt, USA). Los resultados se procesaron con el programa KC4™ v.3.4 (BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). El límite de endotoxinas para el producto de acuerdo a la técnica analítica desarrollada11 en el Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) es de 1,43 EU/mL, por lo tanto la máxima dilución válida para el ensayo fue de 1:144.

El producto terminado se analizó a tiempo cero y se realizaron varias diluciones con su correspondiente control positivo en los tres lotes del escalado (tabla 4). Se seleccionó la dilución 1/100 que permitió evaluar el contenido de endotoxinas bacterianas en el producto terminado; ya que no produjo interferencias en las mediciones realizadas, se observó el hecho de que el porciento de recobrado se encuentran dentro de los límites establecidos que fue entre 50 y 200 %. Los lotes de docetaxel 80 mg solución que se obtuvieron a escala piloto cumplieron con los análisis de esterilidad y apirogenicidad.

 

DISCUSIÓN

Durante los ensayos preliminares, se utilizaron diferentes cantidades de alcohol deshidratado y polisorbato 80. Resultó la proporción (0,2:1), respectivamente, la que finalmente se empleó para la disolución del docetaxel, debido al carácter hidrófobo del principio activo.

En el estudio de estabilidad acelerada a 30 ± 2 °C y 75 % de humedad relativa como muestran la tabla 2, se manifiesta la afectación de la estabilidad de la formulación, ya que a los 6 meses se observa disminución en el contenido del principio activo, debido a la formación a temperatura ambiente de 7-epi docetaxel y 7-epi-10-oxo-docetaxel, que son productos de degradación.16

A los lotes 11001, 11002, 11003 (docetaxel 80 mg) se les siguió el estudio de vida útil, almacenados a temperatura de refrigeración, 2-8 °C (tabla 3). Su estabilidad hasta los 12 meses de fabricación, muestran que los parámetros de calidad se mantienen dentro de las especificaciones establecidas para el producto.

La determinación de endotoxinas bacterianas14,15 por el método de LAL cromogénico cinético demostró que el producto terminado de docetaxel 80 mg solución inyectable no presentó endotoxinas bacterianas en los tres lotes. Las UE/mL y el porciento de recobro están dentro de los límites especificados según la técnica del fabricante13 a partir de una dilución de 1/100, lo que demostró que las condiciones en las que se realizaron los escalados industriales fueron óptimas, al no existir contaminantes microbiológicos durante el desarrollo tecnológico.

Los lotes analizados, física, química, biológica y microbiológicamente a los 12 meses de almacenados a temperatura de refrigeración 2-8 °C responden a las exigencias de calidad que plantea la técnica analítica desarrollada13 en el CIDEM. Por lo que el docetaxel 80 mg solución inyectable con una fecha de vencimiento de 12 meses a temperatura ambiente de 2-8 °C puede ser utilizado en la terapia del cáncer.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Von Minckwitz G. docetaxel/anthracycline combinations for breast cáncer treatment. Expert Opin. Pharmacother. 2007;8(4):485-95.

2. Andersen A, Warren DJ, Brunsvig PF. Alta sensibilidad de los ensayos de docetaxel y paclitaxel en el plasma mediante extracción de fase sólida y cromatografía líquida de alta resolución con detección UV. BMC Clinical Pharmacology. 2006;6:2-2.

3. Sonnichsen DS, Relling MV. Clinical pharmacokinetics of paclitaxel. Clin Pharmacokinet. 1994;27:256-69.

4. Clarke SJ, Rivory LP. Clinical pharmacokinetics of docetaxel. Clin Pharmacokinet. 1999;36:99-114.

5. Sparreboom A, van Tellingen O, Nooijen WJ, Beijnen JH. Preclinical pharmacokinetics of paclitaxel and docetaxel. Anticancer Drugs. 1998;9:1-1.

6. Figgitt DP, Wiseman LR: docetaxel: an update of its use in advanced breast cancer. Drugs. 2000;59:621-51.

7. Eisenhauer EA, Vermorken JB: The taxoids. Comparative clinical pharmacology and therapeutic potential. Drugs. 1998;5:5-30.

8. Baker SD, Zhao M, He P, Carducci MA, Verweij J, Sparreboom A. Simultaneous analysis of docetaxel and the formulation vehicle polysorbate 80 in human plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry. Analytical Biochemistry. 2004;324:276-84.

9. Van Tellingen O, Beijnen JH, Verweij J, Scherrenburg EJ, Nooijen WJ, Sparreboom A. Rapid esterase-sensitive breakdown of polysorbate 80 and its impact on the plasma pharmacokinetics of docetaxel and metabolites in mice. Clin Cancer Res. 1999;5:2918-24.

10. CECMED. Requerimientos de los Estudios de Estabilidad para el Registro de Productos Farmacéuticos nuevos y conocidos. Proyecto de Regulación. La Habana: Cecmed, septiembre de 1999.

11. Izquierdo A. Determinación de docetaxel trihidratado, materia prima. Técnica No. MP11010, 2011. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. La Habana, Cuba.

12. United Pharmacopoeial Convention, Inc. USP 33-NF-28. The United States Pharmaceutical. Twenty sixtieth revision. The National Formulary Twenty First Edition. CD-Rom User Guide. Microbiological test. Rockville: Staff Liaison; 2010.

13. Izquierdo A. Determinación de docetaxel solución inyectable. Técnica No. PT 08003, 2011. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos, Cuba.

14. Perdomo Morales R, Pardo Ruiz Z, Spreitzer I, Lagarto A, Montang T. Monocyte activation test (MAT) realibly detects pyrogens in parenteral formulations of human serum albumin. Altex. 2011;28:227-35.

15. Perdomo Morales Rolando. Ensayo del lisado de amebocitos del Limulus (LAL). Rev Cubana Farm [Internet]. 2004 Abr [citado 2015 Jul 16];38(1). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75152004000100008&lng=es

16. Kumar D, Tomar RS, Deolia SK, Mitra M, Mukherjee R, Burman AC. Isolation and characterization of degradation impurities in docetaxel drug substance and its formulation J Pharm Biomed Anal. 2007;43(4):1228-35.

 

 

Recibido: 16 de julio de 2015.
Aprobado: 20 de julio de 2016.

 

 

Armando Gato del Monte. Centro de investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). La Habana, Cuba. Correo electrónico: armandogm@infomed.sld.cu

Enlaces refback

  • No hay ningún enlace refback.