Importancia de la preparación de la muestra en el estudio del metabolismo del clobenzorex

Resumen

Introducción: La selección del ensayo para estudiar el metabolismo de una sustancia depende de sus reacciones metabólicas, lo que puede influir positivamente en la selectividad del método y en la recuperación de los analitos, entre otros.

Objetivo: Definir la influencia de la preparación de la muestra en el estudio del metabolismo del clobenzorex en las condiciones de trabajo del Laboratorio Antidoping de La Habana.

Métodos: Se colectaron muestras de orina antes y después de la administración de una dosis de clobenzorex a un voluntario supuestamente sano. Se aplicaron tres ensayos A, B y C diseñados para la detección de metabolitos de fase I y de fase II. El método de extracción fue líquido-líquido y la diferencia entre los métodos fue la formación de derivados y la hidrólisis enzimática. La técnica instrumental empleada fue la cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y el modo de adquisición de datos fue SCAN desde 50 a 600 Da.

Resultados: La detección de los metabolitos del clobenzorex más volátiles se vio afectada por la manipulación de la muestra, mientras que los hidroxilados (de fase I) necesitaron de una hidrólisis para ser detectados. Con la aplicación del método A se identificaron 3 compuestos, 5 con la aplicación del método B y con la aplicación del método C se identificaron los 8 metabolitos. A las 24 horas después de administrado el fármaco se pudieron detectar 6 de estos compuestos por el método C.

Conclusiones: La aplicación de los métodos adecuados de preparación de muestras, no solo para detectar el dopaje en atletas, sino también en el estudio del metabolismo de fármacos eliminados en la orina, define la cantidad y la calidad de la información obtenida. Bajo las condiciones del Laboratorio Antidoping de La Habana, una mejor detección del clobenzorex y sus metabolitos requiere de un paso de hidrólisis enzimática y uno de formación de derivados, en aras de obtener analitos con buenas condiciones cromatográficas al ser analizadas por la técnica de CG-EM.